STIMOLA CURIOSITA’, PASSIONE E CORAGGIO
Study of the amyloidogenic conversion of V30M, S52P and V122I transthyretin variants by real-time Nuclear Magnetic Resonance: elucidation of the molecular mechanisms leading to different ATTR amyloidosis severity and different drug response.
Abstract
Use solution NMR to shed light on the structural aspects responsible for the different stability and aggregation propensity of V30M-, S52P- and V122I- TTR compared to WT-TTR and to prove how the discovered hot spots are reverted by mono- and bivalent stabilizers.
- Expression of uniformly and selectively labeled recombinant TTR variants
- Chemical shift perturbation (CSP) analysis and backbone H-bond networks
- Amide-methyl and methyl NOE of core residues Val, Leu, and Ile
- Relaxation rates, NOE values, relaxation dispersion profiles
- Protective factors for amyloidogenic TTR of V30M, V122I and S52P
- Characterization of V30M, S52P and V122I variants under the effect of proteolysis and shear forces
- Kinetics of tetramer dissociation of V30M, S52P and V122I under the effect of proteolysis and shear forces
- Inhibition of fibrillogenesis of V30M and S52P by ThT in the presence of bivalent stabilizers
Utilizzare l'NMR in soluzione per far luce sugli aspetti strutturali responsabili della diversa stabilità e propensione all'aggregazione di V30M-, S52P- e V122I- TTR rispetto a WT-TTR e per dimostrare come gli hot spot scoperti siano invertiti da stabilizzatori mono- e bivalenti.
- Espressione di varianti ricombinanti della TTR uniformemente e selettivamente marcate
- Analisi del Chemical Shift Perturbation (CSP) e reti di legami H dorsali
- NOE amidico-metilico e metilico-metilico dei residui core Val, Leu e Ile
- Velocità di rilassamento, valori di NOE, profili di dispersione del rilassamento
- Fattori di protezione per la TTR amiloidogenica di V30M, V122I e S52P
- Caratterizzazione delle varianti V30M, S52P e V122I sotto l'effetto della proteolisi e forze di taglio
- Cinetica della dissociazione del tetramero di V30M, S52P e V122I sotto l'effetto di proteolisi e forze di taglio
- Inibizione della fibrillogenesi di V30M e S52P da parte di ThT in presenza di stabilizzatori bivalenti
Partenariato
- Università di Pavia-Dipartimento di Medicina Molecolare
- University College London – Division of Medicine, Centre for Amyloidosis
Importo del progetto
Importo totale del progetto Euro 154.000,00
Importo del progetto Uniud Euro 84.000,00
Finanziamento Uniud Euro 0
Durata
- Dal 01/03/2023
- Al 28/02/2025
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